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CRISPR/Cas9基因敲除細(xì)胞株（多克?。?br style="" class="">CRISPR/Cas9敲除技術(shù)

       CRISPR/Cas9敲除技術(shù)的原理是Cas9結(jié)合到sgRNA上，sgRNA的引導(dǎo)序列與基因組DNA中的靶標(biāo)序列結(jié)合，Cas9切割靶標(biāo)序列產(chǎn)生雙鏈斷裂，迫使細(xì)胞進(jìn)行緊急修復(fù)，通常條件下，細(xì)胞偏向于使用非同源末端連接（NHEJ：nonhomologous DNA end joining）的方式對(duì)斷裂的雙鏈進(jìn)行修復(fù)，從而造成靶位點(diǎn)基因的插入或缺失突變，發(fā)生移碼突變可以完全敲除目標(biāo)蛋白。
CRISPR/Cas9基因敲除技術(shù)是繼TALEN基因敲除技術(shù)之后又一大突破，具有操作簡(jiǎn)便，周期短，敲除效率高，作用靶點(diǎn)多，無(wú)基因、細(xì)胞及物種限制，目的基因的大小不受限制，不受轉(zhuǎn)錄本數(shù)量影響等優(yōu)勢(shì)，逐漸成為基因敲除的標(biāo)準(zhǔn)操作工具。
 

CRISPR/Cas9敲除細(xì)胞株（多克?。┑姆?wù)流程

 

1、針對(duì)敲除目的基因設(shè)計(jì)合適的靶點(diǎn)，構(gòu)建3個(gè)CRISPR/Cas9敲除質(zhì)粒并測(cè)序驗(yàn)證。
2、分別將3個(gè)CRISPR/Cas9敲除質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，利用T7EⅠ試驗(yàn)篩選出編輯效率最高的CRISPR/Cas9敲除質(zhì)粒。
3、用編輯效率最高的CRISPR/Cas9敲除質(zhì)粒包裝慢病毒，并且檢測(cè)慢病毒的滴度。
4、用慢病毒感染目的細(xì)胞，抗性篩選獲得CRISPR/Cas9敲除多克隆細(xì)胞。
5、利用T7EⅠ試驗(yàn)檢測(cè)CRISPR/Cas9敲除多克隆細(xì)胞的編輯率。

客戶提供信息

 

1、待敲除目的基因的名稱和編號(hào)(gene ID)。
2、需構(gòu)建敲除株的細(xì)胞信息。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果交付

 

1. CRISPR/Cas9敲除多克隆細(xì)胞。

2. CRISPR/Cas9敲除質(zhì)粒。

3. CRISPR/Cas9敲除質(zhì)粒的序列，酶切鑒定、測(cè)序結(jié)果。

4. T7EⅠ試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果。

5. 說(shuō)明實(shí)驗(yàn)過(guò)程中所用的耗材、儀器設(shè)備和操作過(guò)程的實(shí)驗(yàn)報(bào)告一份。
 

服務(wù)周期：2-3個(gè)月。

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CRISPR/Cas9 基因敲除細(xì)胞株（多克隆）,CRISPR/Cas9 基因敲除細(xì)胞株（多克?。?/p>/

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注：該產(chǎn)品未在中華人民共和國(guó)食品藥品監(jiān)督管理部門申請(qǐng)醫(yī)療器械注冊(cè)和備案，不可用于臨床診斷或治療等相關(guān)用途