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實驗原理:PI(碘化丙啶)染色特點:一是能夠與雙鏈DNA/RNA螺旋的大溝部位結(jié)合,二是不能通過功能正常的完整細胞膜。
細胞周期檢測是利用與PI可以與DNA結(jié)合,其熒光強度直接反映了細胞內(nèi)DNA含量。因此,通過流式細胞儀PI染色法對細胞內(nèi)DNA含量進行檢測時,可以將細胞周期各時相區(qū)分為G1/G0 期,S 期和G2/M 期。
細胞凋亡檢測原理是在正常的活細胞中,磷脂酰絲氨酸(PS)位于細胞膜的內(nèi)側(cè),但在早期凋亡的細胞中,PS 從細胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細胞膜的表面,暴露在細胞外環(huán)境中。Annexin-Ⅴ(膜聯(lián)蛋白-V),能與PS高親和力結(jié)合,可通過細胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結(jié)合。將Annexin V與PI聯(lián)合使用時,PI 則被排除在活細胞(Annexin V-/PI-)和早期凋亡細胞(Annexin V+/PI-)之外,而晚期凋亡細胞和壞死細胞同時被FITC 和PI 結(jié)合染色呈現(xiàn)雙陽性(Annexin V+/PI+)。
細胞周期檢測實驗流程:
細胞凋亡檢測實驗流程:
樣品要求
處于對數(shù)生長期的細胞2*106個。
拓普生物提供:
完整的實驗報告及數(shù)據(jù)處理結(jié)果(流式圖、標準SCI作圖等)
實驗周期:4周
案例分享:
1、細胞周期
2、細胞凋亡
流式檢測細胞周期和細胞亡,流式檢測細胞周期和細胞亡
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