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1、實(shí)驗(yàn)原理(細(xì)胞凋亡檢測(cè)的方法很多,我們采用的哪種?Annexin V/PI雙染法嗎)
細(xì)胞凋亡(Cell apoptosis)是指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定,由基因控制的細(xì)胞自主的有序的死亡,亦稱(chēng)為程序性細(xì)胞死亡。細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死不同,細(xì)胞凋亡不是一件被動(dòng)的過(guò)程,而是主動(dòng)過(guò)程,它涉及一系列基因的激活、表達(dá)以及調(diào)控等的作用,它并不是病理?xiàng)l件下的損傷,而是為更好地適應(yīng)生存環(huán)境而主動(dòng)爭(zhēng)取的一種死亡過(guò)程。
Annexin V(或 Annexin A5)為胞內(nèi)蛋白膜聯(lián)蛋白家族成員,以鈣依賴(lài)的方式與磷脂酰絲氨酸(PS)結(jié)合。PS存在于正常細(xì)胞漿膜的內(nèi)層,但在凋亡早期,膜不對(duì)稱(chēng)性喪失,PS 易位至細(xì)胞表面。熒光標(biāo)記的 Annexin V可與之特異性結(jié)合,表明該細(xì)胞為凋亡細(xì)胞。
機(jī)械損傷(Q1):細(xì)胞膜破損嚴(yán)重,Annexin V-APC染不上。
晚期凋亡(Q2):細(xì)胞膜已經(jīng)受損,7-AAD(ECD-A)與Annexin V-APC染料可以進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)與DNA結(jié)合,不可逆轉(zhuǎn)。
早期凋亡(Q3):細(xì)胞只有磷脂酰絲氨酸PS外翻,細(xì)胞膜完整,對(duì)7-AAD(ECD-A)拒染,可逆轉(zhuǎn)
活細(xì)胞(Q4):對(duì)Annexin V-APC和7-AAD(ECD-A)都拒染
2、技術(shù)應(yīng)用
檢測(cè)藥物、基因或蛋白等對(duì)細(xì)胞凋亡的影響。
3、實(shí)驗(yàn)步驟
1.細(xì)胞培養(yǎng)及種板;2.收集細(xì)胞及計(jì)數(shù);3.孵育染料;4.流式細(xì)胞儀檢測(cè);5. Flowjo分析結(jié)果
4、實(shí)驗(yàn)步驟
客戶(hù)提供:細(xì)胞株(凍存株或培養(yǎng)細(xì)胞)及處理用的藥物,細(xì)胞培養(yǎng)基信息,細(xì)胞特殊處理方式
HYY提供:原始圖片、流式原始數(shù)據(jù),完整實(shí)驗(yàn)報(bào)告
流式細(xì)胞凋亡,流式細(xì)胞凋亡
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