流式細(xì)胞凋亡檢測

定義

      流式細(xì)胞術(shù)（Flow Cytometry, FCM）是一種在功能水平上對單細(xì)胞或其他生物粒子進(jìn)行定量分析和分選的檢測手段，它可以高速分析上萬個(gè)細(xì)胞，并能同時(shí)從一個(gè)細(xì)胞中測得多個(gè)參數(shù)，與傳統(tǒng)的熒光鏡檢查相比，具有速度快、精度高、準(zhǔn)確性好等優(yōu)點(diǎn)，成為當(dāng)代最.先進(jìn)的細(xì)胞定量分析技術(shù)。

特點(diǎn)：一種在液流系統(tǒng)中，快速測定單個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞器的生物學(xué)性質(zhì)，并把特定的細(xì)胞或細(xì)胞器從 群體中加以分類收集的技術(shù)。其特點(diǎn)是通過快速測定庫爾特電阻、熒光、光散射和光吸收來定量測定細(xì)胞 DNA含量、細(xì)胞體積、蛋白質(zhì)含量、酶活性、細(xì)胞膜受體和表面抗原等許多重要參數(shù)。根據(jù)這些參數(shù)將不同性質(zhì)的細(xì)胞分開，以獲得供生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究用的純細(xì)胞群體。目前最高分選速度已達(dá)到每秒鐘3萬個(gè)細(xì)胞。

流式細(xì)胞術(shù)檢測樣品推薦制備方法：

1、直接標(biāo)記抗體（FITC標(biāo)記抗體）：

    1）收集1×106個(gè)細(xì)胞，800rpm離心5min，4℃以上冷PBS洗一次。

    2）用4%多聚.甲醛1ml室溫固定40分鐘，800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞，800rpm離心5min。

    3）用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞，冰上孵育10min，800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個(gè)細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。 加入200ul 1% 多聚.甲醛固定，待測即可。

    4）用流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。

2、未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法：

    1）收集2×106個(gè)細(xì)胞，用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次，800rpm離心5min。

    2）用2ml 4%多聚.甲醛室溫固定細(xì)胞40min，800rpm離心5min；2ml PBS重懸細(xì)胞，800rpm離心5min；

    3）用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞，冰上放置10min,800rpm離心5min。

    4）加入飽和劑量未標(biāo)記抗體，冰上放置40min，800rpm離心5min，用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞，800rpm離心5min，洗去未結(jié)合一抗，重復(fù)一次。

    5）加入熒光標(biāo)記（FITC）標(biāo)記的二抗，冰上避光放置40min后，800rpm離心5min，去上清，PBS洗滌兩次。

    6）加入0.5ml 1%多聚.甲醛重懸細(xì)胞；固定待測。

    7）流式細(xì)胞儀檢測熒光值，每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。

3、 細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析(PI染色)用樣品的制備：

    1）待測樣本制成單細(xì)胞懸液，然后200g離心5分鐘，棄上清。

    2）用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定，4℃保存，至少固定18小時(shí)。

    3）調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升，取1毫升細(xì)胞懸液，用PBS洗三次，細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中，37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。

    4）PI染液終濃度為50微克/毫升，RNase A終濃度為20微克/毫升。

客戶提供

1、需提前預(yù)約，樣本要求為單細(xì)胞懸液或外周血，并請?zhí)峁颖緛碓醇疤幚矸椒ǖ刃畔ⅲ瑫r(shí)說明實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、方法等?/p>

2、熒光探針和抗體等由用戶提供，也可委托我公司代購，用戶所提供抗體應(yīng)可與樣本發(fā)生特異性識別反應(yīng)。

終產(chǎn)品

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