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                       拓普生物可為circRNA研究提供“高通量測序+生物信息學(xué)分析+下游功能驗證”一站式服務(wù)！

CircRNA簡介
circRNAs(Circular RNAs，環(huán)狀RNA)是一類不具有5' 末端帽子和3' 末端poly(A)尾巴，并以共價鍵形成環(huán)形結(jié)構(gòu)的非編碼RNA分子。circRNA主要由pre-mRNA通過可變剪切加工產(chǎn)生，廣泛存在于各種生物細(xì)胞中，具有結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、豐度高、物種間保守性高，表達(dá)具有組織及時空特異性等特征。

近年研究發(fā)現(xiàn)，circRNA可能具有重要的調(diào)控功能，circRNA可以作為“sponge”海綿吸附miRNA ，阻斷miRNA對其靶基因的抑制作用； circRNA通過堿基互補(bǔ)配對直接調(diào)控其他RNA水平；circRNA還能與蛋白質(zhì)結(jié)合,調(diào)控蛋白的活性。由于circRNA對核酸酶不敏感，所以比線性RNA更為穩(wěn)定，這些特點使得circRNA 在新型疾病診斷與治療方法的開發(fā)應(yīng)用上具有明顯優(yōu)勢。但目前對circRNA的研究剛剛起步，其生物學(xué)功能和調(diào)控機(jī)制有待挖掘，是一個值得深入的研究方向。

CircRNA的功能



circRNA研究方案


技術(shù)路線：
1.篩選cirRNA（尋找差異表達(dá)的circRNA）：RNA-seq、芯片、生物信息學(xué)分析。
2.circRNA鑒定及定位：RT-PCR、Sanger測序、Northern blot分析、RNA-Fish。
3.circRNA 表達(dá)分析：細(xì)胞水平、組織水平、臨床樣本驗證。
4.circRNA體外功能驗證：circRNA過表達(dá)或干擾、細(xì)胞轉(zhuǎn)染、細(xì)胞劃痕實驗、transwell遷移和侵襲實驗等。
5.circRNA體內(nèi)功能驗證：circRNA過表達(dá)或干擾、或構(gòu)建異種移植模型、免疫組織化學(xué)、RT-QPCR、WB等。
6.機(jī)制研究：序列預(yù)測比對、設(shè)計microRNA探針和circRNA探針、 RNA pulldown、RT-QPCR、 雙熒光素酶報告系統(tǒng)確定結(jié)合位點。
 

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