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CRISPRa的原理       催化失活的Cas9（dCas9）連上轉(zhuǎn)錄激活子，可以有效促進(jìn)基因組特定位點(diǎn)的轉(zhuǎn)錄，這一工具被稱為CRISPRa。CRISPRa特別適合分析非編碼RNA的具體功能。
  CRISPRa載體介紹       pXD9a和pXD9a-helper是第三代慢病毒載體。pXD9a表達(dá)具有兩個(gè)SM2莖環(huán)結(jié)構(gòu)的sgRNA和dCas9-VP64，pXD9a-helper表達(dá)MS2-P65-HSF1。VP64、P65和HSF1是強(qiáng)轉(zhuǎn)錄激活域。MS2能夠與SM2莖環(huán)結(jié)構(gòu)特異性結(jié)合。由具有SM2莖環(huán)結(jié)構(gòu)的sgRNA、dCas9-VP64和MS2-P65-HSF1組成的復(fù)合體結(jié)合到基因組DNA中的靶位點(diǎn)上，激活下游基因大量轉(zhuǎn)錄。
       pXD9a可以單獨(dú)使用，但是與pXD9a-helper共轉(zhuǎn)染細(xì)胞能獲得更強(qiáng)的激活效果。
 

 CRISPRa質(zhì)粒構(gòu)建流程

 

CRISPRa質(zhì)粒構(gòu)建服務(wù)說(shuō)明

1、客戶提供基因名稱和基因編號(hào)。
2、HYY提供：
       （1）CRISPRa質(zhì)粒（3×20μg pXD9a質(zhì)粒和20μg pXD9a-helper質(zhì)粒），濃度500ng/μL以上，超螺旋率95%以上；
       （2）CRISPRa質(zhì)粒的菌液各500μL；
       （3）CRISPRa質(zhì)粒的測(cè)序圖譜、酶切鑒定結(jié)果和序列；
       （4）CRISPRa質(zhì)粒的構(gòu)建報(bào)告。
3、實(shí)驗(yàn)周期2～3周。

 

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CRISPRa 套餐（3靶點(diǎn)/基因+測(cè)序報(bào)告）,CRISPRa 套餐（3靶點(diǎn)/基因+測(cè)序報(bào)告）

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注：該產(chǎn)品未在中華人民共和國(guó)食品藥品監(jiān)督管理部門(mén)申請(qǐng)醫(yī)療器械注冊(cè)和備案，不可用于臨床診斷或治療等相關(guān)用途