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                       細胞自噬(autophagy or autophagocytosis)：又稱為Ⅱ型細胞死亡，是細胞在自噬相關基因(autophagy related gene，Atg) 的調控下利用溶酶體降解自身受損的細胞器和大分子物質的過程。自噬作為時下的研究熱點，有非常深遠的研究意義。拓普生物在自噬研究方面具有豐富的經驗，我們可以為您提供從課題設計-實驗操作-實驗結果-數據分析的整體解決方案。



細胞自噬形態(tài)學特征的檢測方法
1）透射電鏡觀察自噬體。
自噬體是自噬的標志性結構。自噬體屬于亞細胞結構，直徑一般為300～900nm，平均500nm，普通光鏡下看不到。通過透射電子顯微鏡發(fā)現自噬體一直是觀察自噬現象最直接、最經典的方法，是自噬檢測的“金標準”。

2）熒光顯微鏡下采用GFP-LC3融合蛋白來示蹤自噬形成。


 

由于自噬體膜形成過程中需要LC3，因此通過標記LC3可以識別自噬體。
3）熒光染色法
用熒光染料對組織切片或細胞進行染色觀察自噬的發(fā)生。晚期自噬體與溶酶體融合而呈酸性，根據這個特點可用酸向性染料MDC等和Lyso Tracker標記自噬溶酶體。


 

自噬標志性蛋白
1）自噬標記蛋白LC3
2）細胞自噬底物蛋白的檢測
3）Atg12-Atg5復合體
4）Beclin1 
5）自噬相關的標志性蛋白還包括ATG1、ATG9、DRAM1、ATG14、ATG16以及 ATG18等。
 

自噬的調控通路

1）依賴mTOR（哺乳動物雷帕霉素靶點）途徑的自噬

A．PI3K-AKT-mTOR信號通路
 B. AMPK-TSC 1/2-mTOR 信號通路

2）其它的信號通路

A. 3-甲基腺嘌呤（3-MA）通過抑制Class ⅢPI3K的活性抑制自噬；

B. beclin1和UVRAG作為正調控子，抗凋亡因子bcl-2作為負調控子共同參與組成ClassⅢPI3 復合物調控自噬；

C. GTP結合的G蛋白亞基Gαi3抑制自噬；GDP結合的Gαi3蛋白活化自噬；

D. 死亡相關蛋白激酶（death-associated proteinlinase,DAPK）和DAPK相關蛋白激酶（DAPK-related protein kinase-1,DRP-1）誘導自噬。

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