酵母單雜交文庫篩選
一、 實驗原理：

真核生物基因的轉(zhuǎn)錄起始需轉(zhuǎn)錄因子參與，轉(zhuǎn)錄因子通常由DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(DNA—binding domain，BD)和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域(activation domain，AD)。用于酵母單雜交系統(tǒng)的酵母GAL4蛋白是一種典型的轉(zhuǎn)錄因子，GAL4的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域靠近羧基端，含有幾個鋅指結(jié)構(gòu)，可激活酵母半乳糖苷酶的上游激活位點(UAS)，而轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域可與RNA聚合酶或轉(zhuǎn)錄因子TFIID相互作用，提高RNA聚合酶的活性。在這一過程中，DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域可完全獨立地發(fā)揮作用。在GAL4系統(tǒng)中構(gòu)建與基因的ORFs融合的激活結(jié)構(gòu)域GAL4-AD的特異載體，順式作用元件與GAL4的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域GAL4-BD融合構(gòu)建載體，分別轉(zhuǎn)化酵母細(xì)胞。在酵母內(nèi)表達的蛋白若與順式作用元件發(fā)生相互作用時，就會將GAL4-BD和GAL4-AD結(jié)合在一起，從而與上游激活序列(upstream activating sequence, UAS)結(jié)合，激活相應(yīng)報告基因的表達，在相應(yīng)的營養(yǎng)缺陷型培養(yǎng)基上篩選陽性。
基因轉(zhuǎn)錄實際上是轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子和啟動子區(qū)各種順式作用元件相互作用的結(jié)果，這種結(jié)合猶如蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)的互作一樣具有特異性，這是研究順式作用元件即DNA序列與蛋白質(zhì)互作的基礎(chǔ)。該實驗?zāi)康氖菫榱舜_定已知DNA-蛋白質(zhì)之間是否存在相互作用；分離結(jié)合于目的順式調(diào)控元件或其他短DNA結(jié)合位點蛋白的新基因；定位已經(jīng)證實的具有相互作用的DNA結(jié)合蛋白的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域，以及準(zhǔn)確定位與DNA結(jié)合的核苷酸序列。
 
二、實驗步驟
1.誘餌基因的自激活檢測，檢測通過后繼續(xù)下一步實驗
2.誘餌質(zhì)粒轉(zhuǎn)化酵母細(xì)胞，驗證合格后再轉(zhuǎn)化文庫質(zhì)粒
3.酵母篩選/3AT條件優(yōu)化
4.篩選結(jié)果的測序

三、實驗結(jié)果：
1. 文庫篩選報告（電子版），
2. 文庫篩選圖片（電子版），
3. 篩選測序結(jié)果和陽性克隆實物。

酵母雙雜交文庫篩選
一、 實驗原理：
酵母雙雜交系統(tǒng)是在酵母體內(nèi)通過重建有活性轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)來鑒定蛋白質(zhì)之間的相互作用。轉(zhuǎn)錄因子可以和DNA上特異的序列結(jié)合而啟動相應(yīng)基因的轉(zhuǎn)錄。這種DNA結(jié)合與轉(zhuǎn)錄激活的功能是由轉(zhuǎn)錄因子上兩個相互獨立的結(jié)構(gòu)域即DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(Binding Domain, BD)和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域(Activation Domain, AD)分別來完成的，并且這兩個結(jié)構(gòu)域?qū)τ诨虻霓D(zhuǎn)錄激活都是必須的。在GAL4系統(tǒng)中利用轉(zhuǎn)錄因子GAL4的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域GAL4-BD與激活結(jié)構(gòu)域GAL4-AD的特異載體，分別與基因的ORFs融合，轉(zhuǎn)化酵母細(xì)胞。在酵母內(nèi)表達的蛋白若發(fā)生相互作用時，就會將GAL4-BD和GAL4-AD結(jié)合在一起，從而與上游激活序列(upstream activating sequence, UAS)結(jié)合，激活相應(yīng)報告基因的表達，在相應(yīng)的營養(yǎng)缺陷型培養(yǎng)基上篩選陽性。酵母雙雜交文庫的構(gòu)建是篩庫的前提，可用于目的蛋白的互作蛋白大規(guī)模篩選分析蛋白質(zhì)間的相互作用，是現(xiàn)在分子生物學(xué)與生物化學(xué)常用的手段。
 
二、實驗步驟
1.誘餌基因的自激活和毒性檢測，檢測通過后繼續(xù)下一步實驗
2.誘餌質(zhì)粒轉(zhuǎn)化酵母細(xì)胞，驗證合格后再轉(zhuǎn)化文庫質(zhì)粒
3.篩選結(jié)果的測序

三、實驗結(jié)果：
1. 文庫篩選報告（電子版），
2. 文庫篩選圖片（電子版），
3. 篩選測序結(jié)果和陽性克隆實物。

詳情請關(guān)注公司官網(wǎng)www.xianchunfeng.com

酵母單/雙雜交文庫篩選,酵母單/雙雜交文庫篩選

酵母單/雙雜交文庫篩選信息由西安淳風(fēng)生物科技有限公司為您提供，如您想了解更多關(guān)于酵母單/雙雜交文庫篩選報價、型號、參數(shù)等信息，歡迎來電或留言咨詢。

注：該產(chǎn)品未在中華人民共和國食品藥品監(jiān)督管理部門申請醫(yī)療器械注冊和備案，不可用于臨床診斷或治療等相關(guān)用途