酵母單/雙雜交文庫構(gòu)建
   我公司總經(jīng)理謝士勇畢業(yè)于華中農(nóng)業(yè)大學(xué)生化與分子生物學(xué)專業(yè)，博士期間長期從事酵母單/雙雜交文庫構(gòu)建及篩選的工作，在校期間為實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建了3個(gè)高效的水稻酵母雙雜交文庫（組織分別為水稻葉片，幼穗，種子），具有豐富的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。
    公司在RNA抽提，mRNA純化，酵母轉(zhuǎn)化等步驟中對于試劑選擇有著獨(dú)到的見解，用性價(jià)比最高的試劑為客戶節(jié)約成本。同時(shí)公司對于反轉(zhuǎn)錄，酵母轉(zhuǎn)化，酵母菌落PCR等步驟進(jìn)行優(yōu)化，使得初始基因豐度更高，最大程度保證互作基因/蛋白不致遺漏；轉(zhuǎn)化效率更高，提高弱互作因子篩到的可能性；均一化更高，降低重復(fù)篩到概率；空載體更少，高效并且節(jié)約成本。詳情請關(guān)注公司官網(wǎng)www.xianchunfeng.com

本公司酵母單/雙雜交文庫構(gòu)建核心優(yōu)勢：

降低客戶成本：酵母單/雙雜交文庫構(gòu)建實(shí)驗(yàn)步驟多，難度較大，客戶自己購買試劑經(jīng)濟(jì)和時(shí)間成本較高。

文庫質(zhì)量高：優(yōu)質(zhì)的文庫是篩庫得到陽性克隆的關(guān)鍵，本公司承諾次級文庫庫容大于107，重組率大于90%，平均插入片段大于1kb。

Invitrogen核/膜系統(tǒng)（送三框和均一化處理）

實(shí)驗(yàn)原理：

酵母單雜交
真核生物基因的轉(zhuǎn)錄起始需轉(zhuǎn)錄因子參與，轉(zhuǎn)錄因子通常由DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(DNA—binding domain，BD)和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域(activation domain，AD)。用于酵母單雜交系統(tǒng)的酵母GAL4蛋白是一種典型的轉(zhuǎn)錄因子，GAL4的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域靠近羧基端，含有幾個(gè)鋅指結(jié)構(gòu)，可激活酵母半乳糖苷酶的上游激活位點(diǎn)(UAS)，而轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域可與RNA聚合酶或轉(zhuǎn)錄因子TFIID相互作用，提高RNA聚合酶的活性。在這一過程中，DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域可完全獨(dú)立地發(fā)揮作用。在GAL4系統(tǒng)中構(gòu)建與基因的ORFs融合的激活結(jié)構(gòu)域GAL4-AD的特異載體，順式作用元件與GAL4的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域GAL4-BD融合構(gòu)建載體，分別轉(zhuǎn)化酵母細(xì)胞。在酵母內(nèi)表達(dá)的蛋白若與順式作用元件發(fā)生相互作用時(shí)，就會(huì)將GAL4-BD和GAL4-AD結(jié)合在一起，從而與上游激活序列(upstream activating sequence, UAS)結(jié)合，激活相應(yīng)報(bào)告基因的表達(dá)，在相應(yīng)的營養(yǎng)缺陷型培養(yǎng)基上篩選陽性?；蜣D(zhuǎn)錄實(shí)際上是轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子和啟動(dòng)子區(qū)各種順式作用元件相互作用的結(jié)果，這種結(jié)合猶如蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)的互作一樣具有特異性，這是研究順式作用元件即DNA序列與蛋白質(zhì)互作的基礎(chǔ)。


酵母雙雜交
酵母雙雜交系統(tǒng)是在酵母體內(nèi)通過重建有活性轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)來鑒定蛋白質(zhì)之間的相互作用。轉(zhuǎn)錄因子可以和DNA上特異的序列結(jié)合而啟動(dòng)相應(yīng)基因的轉(zhuǎn)錄。這種DNA結(jié)合與轉(zhuǎn)錄激活的功能是由轉(zhuǎn)錄因子上兩個(gè)相互獨(dú)立的結(jié)構(gòu)域即DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(Binding Domain, BD)和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域(Activation Domain, AD)分別來完成的，并且這兩個(gè)結(jié)構(gòu)域?qū)τ诨虻霓D(zhuǎn)錄激活都是必須的。在GAL4系統(tǒng)中利用轉(zhuǎn)錄因子GAL4的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域GAL4-BD與激活結(jié)構(gòu)域GAL4-AD的特異載體，分別與基因的ORFs融合，轉(zhuǎn)化酵母細(xì)胞。在酵母內(nèi)表達(dá)的蛋白若發(fā)生相互作用時(shí)，就會(huì)將GAL4-BD和GAL4-AD結(jié)合在一起，從而與上游激活序列(upstream activating sequence, UAS)結(jié)合，激活相應(yīng)報(bào)告基因的表達(dá)，在相應(yīng)的營養(yǎng)缺陷型培養(yǎng)基上篩選陽性。酵母雙雜交文庫的構(gòu)建是篩庫的前提，可用于目的蛋白的互作蛋白大規(guī)模篩選分析蛋白質(zhì)間的相互作用，是現(xiàn)在分子生物學(xué)與生物化學(xué)常用的手段。

二、實(shí)驗(yàn)步驟：
1.1   RNA提取

1.2   mRNA分離

1.3   cDNA初級文庫的構(gòu)建
1.3.1 cDNA第一鏈的合成
1.3.2 cDNA第二鏈的合成
1.3.3 cDNA adapter的制備
1.3.4 cDNA與attB1重組接頭連接(三份接頭各連一份)
1.3.5 cDNA分級分離
1.3.6 BP重組
1.3.7 電轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH10B
1.3.8 文庫克隆檢測
1.3.9 文庫庫容量、重組率、插入片段長度鑒定

1.4   cDNA次級文庫的構(gòu)建
1.4.1 初級文庫的質(zhì)粒抽提
1.4.2 LR重組
1.4.3 電轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH10B
1.4.4 文庫克隆檢測
1.4.5 文庫庫容量、重組率、插入片段長度鑒定

三、交付結(jié)果：
1. 文庫構(gòu)建報(bào)告（電子版），
2. 文庫構(gòu)建圖片（電子版），
3. 大腸桿菌甘油菌文庫2支，質(zhì)粒文庫1支。

四、服務(wù)周期：
30個(gè)工作日

五、材料條件：
客戶提供組織或細(xì)胞

六、客戶案例
目前我們已經(jīng)成功為陜西師范大學(xué)，西北大學(xué)，西北農(nóng)林科技大學(xué)，唐都醫(yī)院，西京醫(yī)院，第四軍醫(yī)大學(xué)，貴州師范大學(xué)，華中農(nóng)業(yè)大學(xué)等多家單位完成酵母單/雙雜交文庫構(gòu)建服務(wù)，專業(yè)的服務(wù)和嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度贏得了客戶的一直好評。

七、部分結(jié)果圖片

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酵母單雜交/雙雜交文庫構(gòu)建信息由西安淳風(fēng)生物科技有限公司為您提供，如您想了解更多關(guān)于酵母單雜交/雙雜交文庫構(gòu)建報(bào)價(jià)、型號、參數(shù)等信息，歡迎來電或留言咨詢。

注：該產(chǎn)品未在中華人民共和國食品藥品監(jiān)督管理部門申請醫(yī)療器械注冊和備案，不可用于臨床診斷或治療等相關(guān)用途