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技術優(yōu)勢
(1)高效蛋白提取液進行高質量蛋白的提取,同時高效的蛋白酶抑制劑有效防止蛋白的降解及去磷酸化等作用;
(2)科維創(chuàng)生物擁有多年的Western Blot檢測經驗,為客戶提供專業(yè)的技術服務。
(3)科維創(chuàng)生物為客戶設置預實驗,根據(jù)客戶樣品具體情況摸索最適上樣量和抗體最適稀釋度。
樣品要求
客戶需提供新鮮或正確保存的蛋白樣品或者蛋白提取液,陽性對照樣品(細胞或組織), 檢測目的蛋白的一抗(或由漢恒生物代購)。樣品要求為:
1、細胞不少于5×106個;
2、組織樣品不少于50mg;
3、總蛋白濃度不低于 2μg/μl(至少50μl)。
實驗內容
1、蛋白提取和定量(如果提供蛋白樣品,則直接電泳預實驗檢測抗體特異性);
2、SDS-PAGE 10-15% 變性聚丙烯酰胺凝膠電泳;
3、轉膜(PVDF膜);
4、封閉(5%脫脂奶粉);
5、一抗孵育(其中內參基因為Tubulin、GAPDH或Actin);
6、二抗孵育(如果由于材料降解或一抗造成實驗無法繼續(xù),則收取相關預實驗費用);
7、顯色(ECL);
8、曝光、洗片、分析。
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