? 服務(wù)介紹

       蛋白提取是做WB的必要提取步驟。主要是將組織或細胞的蛋白分離提取出來，以便后續(xù)做WB檢測。蛋白提取主要可以提?。嚎偟鞍?、胞漿/胞核蛋白、線粒體蛋白、膜蛋白。

? 實驗流程

       編號核對-組織取塊-組織勻漿-離心-蛋白定量-蛋白變性

? 實驗樣品要求

       （1）細胞不少于5×106個；

       （2）組織樣品不少于50mg；

       （3）總蛋白濃度不低于 2μg/μl（至少50μl）；

? 注意事項

       （1）每張膜上做一種目的蛋白和相應(yīng)的內(nèi)參蛋白。每張膜上可以做8個樣品。一般狀況下，2周即可完成實驗。如遇特殊情況，如一抗不好，蛋白濃度低或蛋白特殊，如分子量大等，周期會有所延長。

       （2）Western Blot細胞蛋白樣本的準備及運輸：去掉培養(yǎng)液，用PBS洗一次后，加入少量PBS，用細胞刮將細胞刮下，用1ml槍吸取細胞易于1.5ml EP管中，快速離心（升至最高轉(zhuǎn)速就可stop）去除上清后，可按下面兩種方法運輸：A.細胞干運輸：將細胞干放入液氮速凍，-80℃保存; 如需長途過夜運輸，建議干冰運輸；如當(dāng)天送達樣本，可用液氮或者-80℃冰袋運輸；B.細胞裂解液運輸：加入一定量的胞裂解液后即可冷藏運輸（冰袋或者冰盒）。如需檢測磷酸化蛋白，建議裂解液中加入終濃度1mM的NaF，NaF可抑制磷酸酶活性，保護蛋白磷酸化水平。如果加入裂解液后提取蛋白，則置于冰上裂解1 h，12000rpm離心10 min后取上清，即為蛋白樣本。蛋白樣本可-20度冷藏運輸（建議快遞寄送用干冰或者足量-80度冰袋），保存需要-80℃。

       （3）蛋白樣本運輸：蛋白樣本需要經(jīng)過濃度測定，再進行變性，變性時先加入Sample buffer，再95℃ 10 min，Sample buffer可防止變性導(dǎo)致的蛋白沉淀析出。變性的蛋白可直接冷藏運輸，-20℃穩(wěn)定保存。