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一、細(xì)胞特性

細(xì)胞名稱：L5178Y TK+/-clone(3.7.2C)細(xì)胞（小鼠淋巴瘤細(xì)胞）

形態(tài)：淋巴母細(xì)胞樣，懸浮生長(zhǎng)

含量：>1x106 個(gè)/瓶

污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

二、細(xì)胞接收后的處理：
1、貼壁細(xì)胞

收到T25方瓶細(xì)胞后，請(qǐng)檢查是否漏液，如果漏液，請(qǐng)拍照片發(fā)給我們（凍存管細(xì)胞收到后直接37℃水浴復(fù)蘇或直接放置于液氮中長(zhǎng)期儲(chǔ)存）。

請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，換用新鮮的完全培養(yǎng)基。

如果細(xì)胞長(zhǎng)滿（90%以上）請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代。

接到細(xì)胞次日，請(qǐng)檢查細(xì)胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系。

2、懸浮細(xì)胞

收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查是否漏液，如果漏液，請(qǐng)拍照片發(fā)給我們。

請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，去掉封口膜并將15ml離心管置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

1200rpm離心5min，棄去15ml離心管中的培養(yǎng)基，細(xì)胞沉淀用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸并培養(yǎng)。

如果細(xì)胞長(zhǎng)滿（90%以上）請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代。

接到細(xì)胞次日，請(qǐng)檢查細(xì)胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系。

                      
本公司的細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程，供參考
一、培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

準(zhǔn)備H-DMEM培養(yǎng)基，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。

二、細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

   對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化2-3分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細(xì)胞的培養(yǎng)基終止消化。

輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中，在1200RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。

移入到事先準(zhǔn)備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，先要消化處理并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。消化方法按照細(xì)胞傳代方法的1-3步驟進(jìn)行，最后的重懸液使用血清。懸浮細(xì)胞直接計(jì)數(shù)后離心，用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。

注意事項(xiàng)：
1. 收到凍存管細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。
2. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
3. 細(xì)胞用途：僅供科研使用。

發(fā)貨方式：
復(fù)蘇后發(fā)貨：我們復(fù)蘇細(xì)胞后發(fā)貨，貨期一周左右，免運(yùn)費(fèi)。（氣溫較好建議復(fù)蘇后發(fā)貨）
凍存發(fā)貨(干冰運(yùn)輸）：需額外增加干冰運(yùn)費(fèi)，選擇干冰運(yùn)輸?shù)奈覀儼l(fā)兩管細(xì)胞，為了保證客戶接種可靠性多發(fā)一管。（氣溫低于0℃須凍存發(fā)貨）
細(xì)胞發(fā)貨采取專業(yè)的運(yùn)輸包裝，并選擇最快捷的運(yùn)輸方式（順豐速運(yùn)或其他空運(yùn)快遞）
本公司細(xì)胞引種來源：ATCC、DSMZ、ECACC、武大細(xì)胞庫(kù)、上海生化細(xì)胞所、中國(guó)科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會(huì)等。

細(xì)胞培養(yǎng)常用試劑使用問答
1.谷氨酰胺使用方法是什么？
答：谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，故4℃下放置1周可分解50%，使用中最好單獨(dú)配制，置-20℃冰箱中保存，用前加入培養(yǎng)液中。
2.碳酸氫鈉在室溫條件存放是否穩(wěn)定？
答：碳酸氫鈉白色粉末，或不透明單斜晶系細(xì)微結(jié)晶。比重2.159。無臭、味咸，可溶于水，微溶于乙醇。其水溶液因水解而呈微堿性，受熱易分解，在65℃以上迅速分解，在270℃時(shí)完全失去二氧化碳，在干燥空氣中無變化，在潮濕空氣中緩慢分解。
3.培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)減慢的原因有哪些？其解決辦法有哪些？
 答：可能得原因有：更換了不同的培養(yǎng)液或血清；培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長(zhǎng)必需成分如谷氨酰胺或生長(zhǎng)因子等耗盡或缺乏或已被破壞；培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染；試劑保存不當(dāng)；比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)找出可能的原因。
解決辦法：增加起始培養(yǎng)細(xì)胞濃度；讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液；換入新鮮配制培養(yǎng)液；補(bǔ)加谷氨酰胺或生長(zhǎng)因子等；用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，丟棄培養(yǎng)物，或用抗生素除菌；血清需保存在-5℃到-20℃；培養(yǎng)液需在2－8℃避光保存；含血清完全培養(yǎng)液在2-8℃保存，并在2 周內(nèi)用完；分離培養(yǎng)物，檢測(cè)支原體。
4.L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)中重要嗎？它在溶液中不穩(wěn)定嗎？
答：L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)非常重要的。脫掉氨基后，L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過一段時(shí)間后會(huì)降解，降解率隨保存溫度而變。L-谷氨酰胺的降解導(dǎo)致氨的形成，而氨對(duì)于一些細(xì)胞具有毒性。
5.細(xì)胞傳代消化時(shí)所用胰酶濃度越高越好嗎？
答：不見得！因?yàn)橐鹊鞍酌溉芤旱南芰κ呛腿芤旱膒H、溫度、胰酶濃度及溶液中是否含有Ca++, Mg++離子和血清等因素有關(guān)。通常情況下，pH 8.0 , 溫度 37 oC 其作用能力最強(qiáng)。另外，鈣、鎂離子及血清均能大大降低其消化能力。我們每次進(jìn)行傳代消化前，一定要用D-Hanks液或PBS液反復(fù)沖洗細(xì)胞培養(yǎng)瓶，以便于將含血清的培養(yǎng)基沖洗干凈，這樣就能大大提高消化液的消化能力。通常使用的消化液濃度為：
     (1)0.05％胰蛋白酶＋0.02％EDTA；
     (2)0.25% 胰蛋白酶
     多數(shù)細(xì)胞傳代消化可使用0.25％胰蛋白酶＋0.02％EDTA這種消化液。
6.二價(jià)離子抑制胰蛋白酶活性嗎？使用胰蛋白酶時(shí)加入EDTA的目的是什么？
答：二價(jià)離子的確抑制胰蛋白酶活性。EDTA用來螯合游離的鎂離子和鈣離子，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建議胰蛋白酶處理細(xì)胞前，用EDTA清洗細(xì)胞，以消除來自培養(yǎng)基中所有的二價(jià)離子。
7.GlutaMAX-I是什么？培養(yǎng)細(xì)胞如何利用GlutaMAX-I？這個(gè)二肽有多穩(wěn)定？
答：GlutaMAX-I 即谷丙氨酸二肽，是一個(gè)L-谷氨酰胺的衍生物，其不穩(wěn)定的alpha-氨基用L-丙氨酸來保護(hù)。一種肽酶逐漸裂解二肽，釋放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I二肽非常穩(wěn)定，即使在121磅滅菌20分鐘，GlutaMAX-I 二肽溶液有最小的降解，如果在相同條件下，L-谷氨酰胺幾乎完全降解
8.Hank′s 平衡鹽溶液(HBSS)和Earle′s平衡鹽溶液(EBSS)有什么本質(zhì)的功能差別？
答：HBSS和 EBSS的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Eagle′s (2.2g/L)中比在Hanks′ (0.35g/L) 中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡，以維持溶液的PH值。Eagle′s液在空氣水平的CO2 中，溶液會(huì)變堿，Hanks′液在CO2培養(yǎng)箱中會(huì)變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織，需要用Eagle′s液。如果僅僅是清洗將要在細(xì)胞培養(yǎng)基中儲(chǔ)存的組織，用Hanks′液就可以了。

公司簡(jiǎn)介：
    無錫欣潤(rùn)生物科技有限公司是一家致力于為全球藥物公司、衛(wèi)生防疫機(jī)構(gòu)和科研院所提供符合GLP標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范的細(xì)胞系、原代細(xì)胞及體外藥物代謝和藥物間相互作用評(píng)價(jià)的產(chǎn)品公司，并提供以原代細(xì)胞為中心的體外藥物篩選相關(guān)技術(shù)服務(wù)的高新技術(shù)企業(yè)。
    公司擁有多項(xiàng)先進(jìn)成熟的原代細(xì)胞分離培養(yǎng)技術(shù)，其中肝臟類細(xì)胞、成年鼠心肌細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、胰島細(xì)胞、小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、肝S9和肝微粒體等特色產(chǎn)品及相關(guān)服務(wù)獲得眾多合作伙伴的一致好評(píng)。
    公司始終以“專注產(chǎn)品，用心服務(wù)”為核心價(jià)值，致力于打造全球原代細(xì)胞分離培養(yǎng)第一品牌，為全球各類藥物研發(fā)機(jī)構(gòu)提供細(xì)胞生物學(xué)方面的高質(zhì)量產(chǎn)品和優(yōu)質(zhì)服務(wù)。

L5178Y TK+/- clone(3.7.2C)小鼠淋巴瘤細(xì)胞,L5178Y TK+/- clone(3.7.2C)小鼠淋巴瘤細(xì)胞

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注：該產(chǎn)品未在中華人民共和國(guó)食品藥品監(jiān)督管理部門申請(qǐng)醫(yī)療器械注冊(cè)和備案，不可用于臨床診斷或治療等相關(guān)用途