蛋白的酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)是以酵母的遺傳分析為基礎(chǔ)，研究反式作用因子之間的相互作用對真核基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控影響的實(shí)驗(yàn)，同以往研究蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)之間相互作用的實(shí)驗(yàn)手段相比，酵母雙雜交系統(tǒng)具有其獨(dú)特優(yōu)勢。
1、融合體蛋白之間的相互作用是在真核酵母細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行，蛋白質(zhì)保持天然的折疊狀態(tài)，這是其他離體生化檢驗(yàn)方法所缺乏的，它所證實(shí)的蛋白質(zhì)間相互作用將更接近于體內(nèi)的真實(shí)水平。
2、 雙雜交系統(tǒng)的敏感度非常高，蛋白質(zhì)之間結(jié)合常數(shù)低至1mmol/L時(shí)都可以被偵測。
3、 在篩選cDNA 文庫時(shí)，雙雜交系統(tǒng)能夠簡捷地得到編碼相互作用蛋白的基因序列，它只需構(gòu)建質(zhì)粒而不必準(zhǔn)備抗體或純化蛋白，省略了其它體外檢測蛋白之間相互作用方法所必須的蛋白抽提、純化等繁瑣步驟。



酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)原理
以Gal4 系統(tǒng)為例，BD和AD 分別由Gal4 蛋白上不同的兩個(gè)結(jié)構(gòu)域(1-147aa 與768-881aa)構(gòu)成。在利用GAL4 系統(tǒng)篩選cDNA 文庫或研究蛋白間的相互作用時(shí)，DNA 結(jié)合結(jié)構(gòu)域與靶蛋白即"誘餌"相結(jié)合，轉(zhuǎn)錄活化結(jié)構(gòu)域與文庫蛋白或要驗(yàn)證的蛋白相結(jié)合。一般情況下，單獨(dú)的BD 可以與GAL4 上游活化序列（GAL UAS）結(jié)合但不能引起轉(zhuǎn)錄，單獨(dú)的AD 則不能與GAL UAS 結(jié)合；只有當(dāng)BD 與 AD 分別表達(dá)的融合蛋白由于相互作用而導(dǎo)致兩者在空間上相互靠近時(shí)，BD 與AD 才能與 GAL UAS結(jié)合并且引起報(bào)道基因的轉(zhuǎn)錄，從而激活下游報(bào)告基因，通過這一系列實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證兩個(gè)蛋白之間的相互作用。

酵母單/雙雜交檢測服務(wù)項(xiàng)目列表

服務(wù)項(xiàng)目服務(wù)說明周期報(bào)價(jià)酵母單雜交文庫構(gòu)建技術(shù)服務(wù)基于重組方法的文庫構(gòu)建方案4-6周詢價(jià)酵母單雜交文庫篩選技術(shù)服務(wù)DNA—蛋白質(zhì)相互作用12-15周核蛋白體系酵母雙雜交文庫篩選技術(shù)服務(wù)基于pDEST22或pGADT7系統(tǒng)14-16周膜蛋白體系酵母雙雜交文庫篩選技術(shù)服務(wù)基于分離的泛素介導(dǎo)的膜蛋白酵母雙雜交系統(tǒng)14-16周

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