詳細(xì)說明
商品詳情:
2×Taq plus Master Mix含紅色染料
產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
BL553A | 2×Taq plus Master Mix 含紅色染料 | 1 ml |
BL553B | 2×Taq plus Master Mix 含紅色染料 | 5×1 ml |
BL553C | 2×Taq plus Master Mix 含紅色染料 | 25×1ml |
BL553D | 2×Taq plus Master Mix 含紅色染料 | 100×1 ml |
注:以50μl PCR反應(yīng)體系為例,1ml可40次PCR反應(yīng),5ml可做200次PCR反應(yīng),25ml可1000次PCR反應(yīng),100ml可做4000次PCR反應(yīng)。
產(chǎn)品簡介:
本制品是將PCR反應(yīng)所需的Taq酶、dNTPs、Mg2+以及反應(yīng)緩沖液預(yù)先配制成2倍濃度的混合物。2×Taq plus Master Mix專為常規(guī)PCR擴增反應(yīng)優(yōu)化,使用時只需再加入模板和引物并用水補足體系至反應(yīng)濃度為1×,即可進行PCR反應(yīng),大大地簡化了操作過程,減少了PCR操作過程中的污染。經(jīng)測試,染料的加入不影響PCR反應(yīng),在PCR反應(yīng)完成后可直接電泳,節(jié)省時間。使用本試劑擴增得到的PCR產(chǎn)物3′端有一突出"A"堿基,可直接克隆于T載體中。
產(chǎn)品特點 :
直接上樣:含染料PCR產(chǎn)物可直接上樣進行凝膠電泳分析;
高度靈敏:高純度的酶帶來優(yōu)良的靈敏性;
無基因組污染:擴增產(chǎn)物純度高;
高效擴增:優(yōu)化的緩沖體系發(fā)揮更強的擴增性能;
重復(fù)性好:體系預(yù)混合,減小加樣誤差,降低污染機會;
性能穩(wěn)定:4℃保存3-6個月或室溫(25℃)保存2-4周,反復(fù)凍融50次,擴增性能無變化;
批次穩(wěn)定:遵循標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)流程,經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量檢測。。
質(zhì)量保證:
經(jīng)檢測無外源核酸酶殘留,qPCR方法檢測無大腸桿菌DNA殘留,能有效擴增人基因組中的單拷貝基因。
使用說明:
1、冰浴中徹底融化2×Master Mix,混勻后離心快甩將溶液收集到管底。
2、按照下表在0.2ml PCR管中制備反應(yīng)體系:
50μl反應(yīng)體系 | 終濃度 | |
2×Master Mix | 25μl | 1× |
上游引物 10μM | 1-5μl | 0.2-1.0 μM |
下游引物 10μM | 1-5μl | 0.2-1.0 μM |
模板 | × μl | 1-30ng(質(zhì)粒) 10ng-1μg(基因組) |
水 | 補至50μl |
3、快甩離心將反應(yīng)液收集到管底。
4、PCR儀如果沒有熱蓋加熱的話,補加25μl礦物油。
5、PCR儀上執(zhí)行以下程序:
步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 2 min | 1 |
變性 | 94℃ | 30 sec | 25-32* |
退火 | Tm-5℃* | 30 sec | |
延伸 | 72℃ | 60s/kb | |
最后延伸 | 72℃ | 5-10 min | 1 |
注: PCR 反應(yīng)條件視模板、引物等的結(jié)構(gòu)條件不同而各異。在實際操作中需根據(jù)模板、目的片段的大小、堿基序列和引物的長短等具體情況,根據(jù)比例放大或縮小體系,設(shè)定最佳的反應(yīng)條件(溫度、時間等)。
6、電泳檢測:含染料的2×Taq plus Master Mix可以直接上樣。
注意事項:
1、 需要溶解完全后使用,防止離子濃度不均勻。
2、 菌液 PCR 時預(yù)變性時間≥5min,更有利于破壁。
3、 應(yīng)根據(jù)實驗?zāi)康倪x擇合適循環(huán)數(shù),循環(huán)數(shù)過少,會造成擴增量不足;循環(huán)數(shù)過多,擴增量增加,但突變率也會增加,并造成非特異性擴增。
4、 根據(jù)引物 Tm 值設(shè)置合適退火溫度,退火溫度過低,會造成非特異性擴增;過高可能擴增不出來。
5、 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
保存條件:
-20℃保存兩年有效;4℃穩(wěn)定貯存6個月。經(jīng)常使用時,一旦融化后請4℃貯存,盡量避免反復(fù)凍融。
注:如保存溫度長期低于-30℃或遇干冰急凍,本產(chǎn)品顏色會變淺直至變黃(與急凍程度相關(guān))。經(jīng)測試,該變化不影響使用效果。