點擊查看說明書

Mito-Tracker Red CMXRos (線粒體紅色熒光探針)，也稱MitoTracker Red CMXRos，是一種具有細胞通透性的X-rosamine衍生物(Chloromethyl-X-rosamine，簡稱CMXRos)，能夠特異性地標記細胞中具有生物活性的線粒體，檢測線粒體膜電位。本產品為高純度進口分裝探針，兼容后續(xù)的細胞固定和通透，但染色后再固定和通透，熒光強度會有一定程度的下降。

本產品是一種氧化型的紅色熒光染料，只需簡單地和細胞孵育，即可通過被動運輸穿過細胞膜，并借助本探針含有的弱巰基反應性的氯甲基(mildly thiol-reactive chloromethyl)官能團特異性地標記有生物活性的線粒體。本探針含有的弱巰基反應性的氯甲基，可以和線粒體內蛋白的巰基反應并共價連接，因此后續(xù)實驗使用多聚甲醛或甲醛等醛類固定劑，以及細胞通透的去垢劑Triton X-100等處理時，線粒體的熒光標記不會消失，但可能會有一定程度的下降(約下降2-10倍)。由于本熒光探針的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜與常見的綠色熒光探針重疊較少，因此非常適合用于熒光雙標實驗。

Mito-Tracker Red CMXRos分子式為C₃₂H₃₂C_l2N_2O，分子量為531.5，CAS number為167095-09-2，Mito-Tracker Red CMXRos呈紅色熒光，最大激發(fā)波長為579nm，最大發(fā)射波長為599nm。Mito-Tracker Red CMXRos的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜以及結構式參考圖1。

圖1.Mito-Tracker Red CMXRos的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜(A)以及結構式(B)。

Mito-Tracker Red CMXRos可以用作線粒體特異性的熒光探針。和Rhodamine 123或JC-1相似，Mito-Tracker Red CMXRos對于線粒體的染色依賴于線粒體膜電位，因此該探針只能對活的細胞或組織進行染色，不能對固定或通透后的細胞或組織進行染色。使用Mito-Tracker Red CMXRos染色活細胞線粒體效果參考圖2。

圖2.Mito-Tracker Red CMXRos (進口原料)染色NRK-52E細胞(大鼠腎小管上皮細胞)線粒體的效果。圖A為明場下大鼠腎小管上皮細胞形態(tài)圖；藍色熒光為Hoechst 33342染色(C1027/C1028/C1029 Hoechst 33342活細胞染色液(100X))大鼠腎小管上皮細胞的細胞核(圖B)，紅色熒光為Mito-Tracker Red CMXRos染色大鼠腎小管上皮細胞的線粒體(圖C)，圖D為Hoechst 33342和Mito-Tracker Red CMXRos雙染的大鼠腎小管上皮細胞的細胞核與線粒體。實測數(shù)據會因實驗條件、檢測儀器等的不同而存在差異，圖中數(shù)據僅供參考。

由于Mito-Tracker Red CMXRos在線粒體內的聚集依賴于線粒體的膜電位，因此本產品也可以作為線粒體膜電位的指示探針，通過檢測線粒體膜電位的變化來檢測細胞凋亡。

按最終工作濃度為50-200nM計算，本產品每50μg可以配制約500-2000ml Mito-Tracker Red CMXRos工作液。

包裝清單：    

保存條件：  
   

-20℃避光保存，一年有效。

注意事項：  
   

Mito-Tracker Red CMXRos (進口原料)可以用于活細胞的線粒體熒光染色，不適合用于固定后細胞或者組織的染色；但在用本產品標記線粒體后，后續(xù)可以進行固定和通透，并用其它探針進行染色或進行免疫熒光染色，但染色后再固定和通透，熒光強度會有一定的下降。而且不同的細胞，固定和通透的影響會有所區(qū)別，建議對固定和通透試劑、條件進行一定的測試。

本產品僅包含非常微量的粉末，使用前請先離心數(shù)秒鐘，使微量粉末充分沉降到管底。

熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

使用本產品可以在常見的多孔板或培養(yǎng)皿中進行熒光染色，也可以在蓋玻片或載玻片上進行熒光染色。

本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用說明：    
    1.Mito-Tracker Red CMXRos儲存液的配制：    
取一管50μg Mito-Tracker Red CMXRos粉末加入470μl的無水DMSO (anhydrous dimethylsulfoxide)，充分溶解后，得到濃度為200μM的Mito-Tracker Red CMXRos儲存液。也可以根據需要配制成其它濃度的儲存液，如1mM。適當分裝后避光保存于-20℃或更低溫度。    
    2.Mito-Tracker Red CMXRos工作液的配制：    
a.取少量200μM Mito-Tracker Red CMXRos儲存液按照1:1000-1:10,000的比例加入到細胞培養(yǎng)液或適當?shù)娜芤?例如含鈣鎂離子的HBSS)中，使最終濃度為20nM-200nM。例如取1μl 200μM的Mito-Tracker Red CMXRos儲存液加入到1ml細胞培養(yǎng)液或適當?shù)娜芤?例如含鈣鎂離子的HBSS)中，混勻后即為200nM的Mito-Tracker Red CMXRos工作液。如果染色的細胞后續(xù)需要進行固定或通透等步驟，建議工作濃度為50nM-200nM。    Hanks' Balanced Salt Solution (with Ca²⁺ & Mg²⁺) (C0219)可以向碧云天訂購。    
b.Mito-Tracker Red CMXRos工作液使用前需37℃預溫育。    
注：Mito-Tracker Red CMXRos工作液的濃度可以根據實際情況進行適當調整。為降低非特異性熒光染色和線粒體毒性，在染色效果可以接受的范圍內，建議盡量使用較低濃度的Mito-Tracker Red CMXRos。    
    3.貼壁細胞的線粒體染色：    
a.當細胞在細胞培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿中培養(yǎng)至一定密度時，去除細胞培養(yǎng)液，加入步驟2中配制好的Mito-Tracker Red CMXRos工作液，37℃孵育15-30分鐘。注：最佳孵育時間需根據細胞類型進行適當?shù)膬?yōu)化。    
b.去除Mito-Tracker Red CMXRos工作液，加入37℃預溫育的新鮮細胞培養(yǎng)液。    
c.用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡或熒光酶標儀進行觀察或檢測。此時可觀察到線粒體呈明亮的強熒光染色。如果染色效果欠佳，可以提高Mito-Tracker Red CMXRos工作液濃度或在推薦的時間范圍內適當延長染色時間。    
注：標記的Mito-Tracker Red CMXRos易淬滅，請注意盡快進行拍照等熒光檢測。也可以通過降低熒光顯微鏡的激發(fā)光強度(即汞燈或LED光源)或適當降低Mito-Tracker Red CMXRos工作液濃度以延緩淬滅。    
    4.懸浮細胞的線粒體染色：    
a.1000×g離心5分鐘，棄上清，用37℃預熱的Mito-Tracker Red CMXRos工作液輕輕重懸細胞，37℃孵育15-30分鐘。注：最佳孵育時間需根據細胞類型進行適當?shù)膬?yōu)化。    
b.孵育結束后，1000g離心5分鐘，棄上清，加入37℃預溫育的新鮮細胞培養(yǎng)液重懸細胞。    
c.用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、流式細胞儀或熒光酶標儀進行觀察、分析或檢測。    
注：如果需要在載玻片或蓋玻片上固定懸浮細胞，可先用碧云天的    Poly-D-lysine/多聚賴氨酸(ST508)處理載玻片或蓋玻片。    
    5.染色后的細胞固定或細胞通透(選做)：    
用本試劑染色線粒體后，可進行固定和通透，并用其它探針再進行染色。    
a.細胞固定：在染色后，用37℃溫育的新鮮細胞培養(yǎng)液或HBSS洗滌細胞，小心吸除洗滌用的培養(yǎng)液，加入4%多聚甲醛固定液(例如    P0099)或含3.7%新鮮甲醛的完全培養(yǎng)液，室溫固定15-30分鐘。固定完成后用HBSS洗滌2-3次。    
注：采用37℃預熱的固定液并在37℃固定約15min，可更好地維持細胞形態(tài)。對于內皮細胞，在本染料染色之后再用含3.7%甲醛的完全培養(yǎng)液于37℃孵育15分鐘有良好的固定效果。    
b.細胞通透：將固定后的細胞加入含約0.2% Triton X-100的PBS或碧云天生產的    免疫染色通透液(Triton X-100) (P0096)或    免疫染色強力通透液(P0095)，室溫孵育10-15分鐘。然后用PBS洗滌。使用本探針染色活細胞后，再固定和通透的細胞內熒光效果參考圖3。    
注1：對于內皮細胞，在本染料染色之后再用含約0.2% Triton X-100的PBS室溫孵育10分鐘有良好的通透效果。    
注2：也可用丙酮冰浴通透5分鐘，然后用PBS洗滌。即使后續(xù)無需抗體標記，丙酮通透處理對降低背景信號也會有一定的幫助。    
注3：染色后再固定和通透，熒光強度會有一定的下降，而且不同的細胞，固定和通透的影響會有所區(qū)別，建議對固定和通透試劑的濃度等進行一定的摸索。    
       
   

圖3.Mito-Tracker Red CMXRos (進口原料)染色NRK-52E細胞后再經固定和通透的細胞熒光染色效果。正常NRK-52E細胞Mito-Tracker Red CMXRos (進口原料) 染色后線粒體內呈清晰明亮的紅色熒光(圖A)；染色后經4%多聚甲醛固定液(P0099)室溫固定15分后細胞內紅色熒光略有下降，熒光出現(xiàn)一定程度的彌散(圖B)；固定后經免疫染色強力通透液(P0095)通透后細胞內紅色熒光進一步下降(約下降2-10倍)，細胞內線粒體呈較弱的紅色熒光，但線粒體染色相對比較清晰(圖C)。注：由于通透后線粒體熒光有一定程度的下降，為了方面觀察，圖C延長了拍攝時的曝光時間。實測數(shù)據會因實驗條件、檢測儀器等的不同而存在差異，圖中數(shù)據僅供參考。

相關產品：