商品詳情：

 Annexin V-FITC/PI Apoptosis Assay Kit

Annexin V-FITC/PI雙染細胞凋亡檢測試劑盒

產品簡介：

磷脂酰絲氨酸（PS）是一種帶負電荷的磷脂，正常細胞中，PS只分布在細胞膜脂質雙層的內側，而在細胞凋亡早期，細胞膜中的PS由脂膜內側翻向細胞膜外側，使PS暴露在細胞膜外表面。而Annexin V是一種分子量為35~36kD的Ca²⁺依賴性磷脂結合蛋白，與磷脂酰絲氨酸有高度親和力，故可通過細胞外側暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結合。因此Annexin V被公認為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。

本產品將Annexin V進行綠色熒光素（FITC）標記，以標記了的Annexin V作為探針，利用熒光顯微鏡或流式細胞儀可檢測細胞凋亡的發(fā)生。碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一種核酸染料，它不能透過正常細胞或早期凋亡細胞的完整的細胞膜，但對凋亡中晚期的細胞和壞死細胞，PI能夠透過細胞膜而使細胞核染紅。因此采用Annexin V與PI雙染的方法，就可以將處于不同凋亡時期的細胞區(qū)分開來。

本試劑盒可應用于培養(yǎng)細胞凋亡檢測（不推薦用于檢測組織樣本）。

產品組成：

使用方法：

1.細胞樣品的準備：

A．懸浮細胞：

（1）收集細胞至離心管中1000-2000rpm離心5min，小心去除上清。

（2）用1ml 4℃預冷PBS輕輕重懸細胞并計數(shù)，1000-2000rpm離心5min，小心吸除上清。

（3）再加入1ml 4℃預冷的PBS重懸細胞，1000-2000rpm離心5min，小心吸除上清。

B．貼壁細胞：

（1）吸出細胞培養(yǎng)液至離心管中，PBS洗滌貼壁細胞一次，加入適量不含EDTA的胰酶細胞消化液消化細胞。

（2）室溫孵育至輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時，吸除胰酶細胞消化液。需避免胰酶的過度消化。

（3）加入以上步驟中收集的細胞培養(yǎng)液，稍混勻，轉移到離心管內，1000-2000rpm離心5min，小心吸除上清。

注：加入的細胞培養(yǎng)液一方面可以收集已經(jīng)懸浮的發(fā)生凋亡或壞死的細胞，另一方面細胞培養(yǎng)液中的血清可以有效抑制或中和殘留的胰酶；殘留的胰酶會消化并降解后續(xù)加入的Annexin V-FITC導致染色失敗。

（4）用1ml 4℃預冷PBS輕輕重懸細胞并計數(shù)，1000-2000rpm離心5min，小心吸除上清。

（5）再加入1ml 4℃預冷的PBS重懸細胞，1000-2000rpm離心5min，小心吸除上清。

2.用去離子水按1：4稀釋Binding Buffer（4ml Binding Buffer+12ml去離子水）；

3.用250μl稀釋過的Binding Buffer重新懸浮細胞，調節(jié)其濃度為1×10⁶/ml；

4.取100μl的細胞懸液于5 ml流式管中，加入5μl Annexin V-FITC，輕輕混勻；

5.室溫(20-25℃)避光孵育10min；

6.上機前5min加入10μl碘化丙啶溶液，輕輕混勻；

7.上機前在反應管中補加400μl PBS重懸細胞， 避光保存，隨即進行流式細胞儀（FACS）檢測， Annexin V-FITC為綠色熒光，PI為紅色熒光。

保存條件：

4℃避光保存，有效期一年。