產(chǎn)品簡介：

    碧云天生產(chǎn)的顯色法TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(Colorimetric TUNEL Apoptosis Assay Kit)為您提供了一種高靈敏度又快速簡便的細胞凋亡檢測方法。對于待檢測的細胞或組織樣品，經(jīng)過生物素標記和后續(xù)的DAB顯色等步驟，即可在普通光學顯微鏡下觀察到凋亡細胞。
    細胞在發(fā)生凋亡時，會激活一些DNA內(nèi)切酶，這些內(nèi)切酶會切斷核小體間的基因組DNA。細胞凋亡時
抽提DNA進行電泳檢測，可以發(fā)現(xiàn)180-200bp的DNA ladder?；蚪MDNA斷裂時，暴露的3'-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,TdT)的催化下加上生物素(Biotin)標記的dUTP(Biotin-dUTP)，隨后和辣根過氧化物酶(HRP)標記的Streptavidin (Streptavidin-HRP)結(jié)合，最后在HRP的催化下通過DAB顯色來顯示凋亡細胞，從而可以通過普通光學顯微鏡檢測到凋亡的細胞，這就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法檢測細胞凋亡的原理。
    本試劑盒有如下優(yōu)點。(1)高靈敏度：背景染色極低，陽性染色強，可以在單細胞水平檢測到細胞凋亡，同時由于凋亡早期就有 DNA斷裂，可以檢測到早期的細胞凋亡。(2)特異性好：TUNEL檢測時通常更
容易標記凋亡細胞，而不容易標記壞死細胞。(3)快速：僅需約2-3個小時即可完成。(4)應用范圍廣：可以用于檢測冷凍或石蠟切片中的細胞凋亡情況，也可以檢測培養(yǎng)的貼壁細胞或懸浮細胞的凋亡情況。
    TUNEL法特異性檢測細胞凋亡時產(chǎn)生的DNA斷裂，但不會檢測出射線等誘導的DNA斷裂(和細胞凋亡時
的斷裂方式不同)。這樣一方面可以把凋亡和壞死區(qū)分開，另一方面也不會把射線等誘導發(fā)生DNA斷裂的非凋亡細胞判斷為凋亡細胞。
    極少數(shù)細胞凋亡時沒有DNA斷裂，此時不適用TUNEL法檢測。在個別類型的壞死細胞中也發(fā)現(xiàn)TUNEL檢測呈陽性。在需要嚴格判斷細胞凋亡的情況下，最好同時檢測多個凋亡指標。
    本試劑盒足夠檢測20個樣品。
包裝清單：

保存條件：
    -20℃保存，DAB顯色液A和DAB顯色液B需避光保存。
注意事項：
    需自備用于洗滌細胞的PBS或HBSS，用于封片的抗熒光淬滅封片液(P0126)等適當?shù)姆馄?，用于?br/>定的4%多聚甲醛或向碧云天訂購免疫染色固定液(P0098)，同時需自備含0.1% Triton X-100的PBS或向碧云天訂購免疫染色洗滌液(P0106)。 需自備過氧化氫，除石蠟切片外需自備甲醇。
    如果用于石蠟切片的檢測，需自備蛋白酶K和二甲苯。蛋白酶K(ST533)可以向碧云天訂購。
    本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
    為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用說明：
1. 對于貼壁細胞或細胞涂片：
   a. 用PBS或HBSS洗滌1次。
   b. 如果細胞貼得不牢，可以干燥樣品使細胞貼得更牢。
   c. 用4%多聚甲醛或碧云天生產(chǎn)的免疫染色固定液(P0098)固定細胞30-60分鐘。
   d. 用PBS或HBSS洗滌1次。
   e. 加入含0.1% Triton X-100的PBS或碧云天生產(chǎn)的免疫染色洗滌液(P0106)，冰浴孵育2分鐘。
   f. 用PBS或HBSS洗滌1次。
   g. 再用甲醇配制的0.3%過氧化氫溶液(0.3% H₂O₂ in Methanol)中室溫孵育20分鐘，以滅活切片內(nèi)源
      的過氧化物酶。隨后用PBS或HBSS洗滌3次。
   h. 轉(zhuǎn)步驟5。
2. 對于懸浮細胞或細胞懸液：
   a. 收集細胞(不超過200萬細胞)，用PBS或HBSS洗滌1次。
   b. 涂片，使細胞粘附在載玻片上?？梢愿稍飿悠肥辜毎N得更牢，或使用適當?shù)恼掣皆噭?br/>    c. 用4%多聚甲醛或碧云天生產(chǎn)的免疫染色固定液(P0098)固定細胞30-60分鐘。
   d. 用PBS或HBSS洗滌1次。
   e. 用含0.1% Triton X-100的PBS或碧云天生產(chǎn)的免疫染色洗滌液(P0106)重懸細胞，冰浴孵育2分
      鐘。
   f. 用PBS或HBSS洗滌1次。
   g. 再用甲醇配制的0.3%過氧化氫溶液(0.3% H₂O₂ in Methanol)中室溫孵育20分鐘，以滅活切片內(nèi)源
      的過氧化物酶。隨后用PBS或HBSS洗滌3次。
   h. 轉(zhuǎn)步驟5。
3. 對于石蠟切片：
   a. 二甲苯中脫蠟5-10分鐘。換用新鮮的二甲苯，再脫蠟5-10分鐘。無水乙醇5分鐘。90%乙醇2分鐘。
      70%乙醇2分鐘，蒸餾水2分鐘。
   b. 滴加20μg/ml不含DNase的蛋白酶K，20-37℃作用15-30分鐘(不同組織的最佳作用溫度和時間需自
      行摸索)。
   c. 用PBS或HBSS洗滌3次。注意：這一步必須把蛋白酶K洗滌干凈，否則會嚴重干擾后續(xù)的標記反應。
   d. 再用PBS配制的3%過氧化氫溶液(3% H₂O₂ in PBS)中室溫孵育20分鐘，以滅活切片內(nèi)源的過氧化物
      酶。隨后用PBS或HBSS洗滌3次。注：請勿在用PBS配制的3%過氧化氫溶液中孵育過長時間，否則會
      出現(xiàn)過氧化氫導致的DNA斷裂，從而產(chǎn)生假陽性。
   e. 轉(zhuǎn)步驟5。
4. 對于冷凍切片：
   a. 用4%多聚甲醛或碧云天生產(chǎn)的免疫染色固定液(P0098)固定細胞30-60分鐘。
   b. PBS或HBSS洗滌2次，每次10分鐘。
   c. 加入含0.1% Triton X-100的PBS或碧云天生產(chǎn)的免疫染色洗滌液(P0106)，冰浴孵育2分鐘。
   d. 再用甲醇配制的0.3%過氧化氫溶液(0.3% H₂O₂ in Methanol)中室溫孵育20分鐘，以滅活切片內(nèi)源
      的過氧化物酶。隨后用PBS或HBSS洗滌3次。
   e. 轉(zhuǎn)步驟5。
5. 配制生物素標記液：
   參考下表配制適量的生物素標記液，需充分混勻。注意：配制好的生物素標記液必須一次使用完
   畢，不宜凍存。