產(chǎn)品簡介：

    神經(jīng)氨酸酶抑制劑篩選試劑盒(Neuraminidase Inhibitors Screen Kit)是一種用熒光法快速高靈敏度高通量篩選神經(jīng)氨酸酶抑制劑的試劑盒。
    禽流感病毒在其外殼上有兩種糖蛋白，一種是haemagglutinin，簡稱HA，另一種是neuraminidase，簡稱NA，也稱唾液酸酶(sialidase)。目前治療H5N1型禽流感的常見藥物包括瑞士羅氏制藥公司生產(chǎn)的Oseltamivir (Tamifu，達(dá)菲為其商品名)和葛蘭素史克公司(GlaxoSmithKline)生產(chǎn)的Zanamivir (Relenza，瑞樂砂為其商品名)，這兩種藥物都是neuraminidase的抑制劑。但達(dá)菲價(jià)格昂貴，普通百姓很難承受。并且達(dá)菲生產(chǎn)能力有限，如果發(fā)生較大規(guī)模的禽流感疫情，該藥物的供給量有限。另外，在一些禽流感疫情中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了達(dá)菲耐受的禽流感病毒，在達(dá)菲的臨床測試中就發(fā)現(xiàn)存在一些對達(dá)菲耐受的禽流感病毒。Zanamivir不能口服，使應(yīng)用范圍受到限制。因此，尋找新的神經(jīng)氨酸酶抑制劑作為治療禽流感的藥物非常迫切。希望本試劑盒能有助于尋找到更好的價(jià)廉物美的禽流感藥物。
    試劑盒中提供了純化的神經(jīng)氨酸酶和可以被神經(jīng)氨酸酶催化產(chǎn)生熒光的底物，并且對神經(jīng)氨酸酶的用量和底物的使用量進(jìn)行了優(yōu)化。不僅能檢測出IC50很低的抑制劑，也能檢測出IC50較高的抑制劑。
    本試劑盒可以篩選溶解于水的抑制劑，也可以篩選溶解于甲醇、乙醇、DMSO的抑制劑。其它溶劑未經(jīng)測試。
    用于96孔板檢測時(shí)，一個(gè)包裝的本試劑盒可以檢測100個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品。
包裝清單：

保存條件：
    -20℃保存，一年有效。神經(jīng)氨酸酶熒光底物需避光保存。
注意事項(xiàng)：
    神經(jīng)氨酸酶和神經(jīng)氨酸酶熒光底物盡量避免反復(fù)凍融。
    試劑盒中所用溶液溶解后4℃保存，兩天有效。如果兩天內(nèi)不能全部用完，建議盡早把留作以后使用的神經(jīng)氨酸酶和神經(jīng)氨酸酶熒光底物適當(dāng)分裝后-70℃保存，-20℃凍存也可，但有效期會較短。其余試劑直接-20℃或-7℃保存即可。
    需使用熒光酶標(biāo)儀，并需自備專門用于熒光酶標(biāo)儀熒光檢測的96孔熒光酶標(biāo)板。或使用可以檢測小體積樣品的熒光分光光度計(jì)。使用熒光分光光度計(jì)時(shí)參考熒光酶標(biāo)板的操作方法。
    由于熒光檢測非常靈敏，測定出來的熒光強(qiáng)度有時(shí)容易產(chǎn)生波動。一方面要避免灰塵等掉入檢測孔中產(chǎn)生熒光干擾，另一方面所有檢測最好在同一塊檢測板上做雙份平行檢測甚至三份平行檢測。
    本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
    為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用說明：
1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線檢測的準(zhǔn)備(參考表1)：
    a. 在96孔熒光酶標(biāo)板內(nèi)每孔加入70微升神經(jīng)氨酸酶檢測緩沖液。
    b. 每孔再分別加入0、1、2、5、7.5、10微升神經(jīng)氨酸酶。
    c. 每孔再加入0-20微升Milli-Q水使每孔總體積為90微升。
2. 樣品檢測的準(zhǔn)備(參考表1)：
    a. 在96孔熒光酶標(biāo)板內(nèi)每孔加入70微升神經(jīng)氨酸酶檢測緩沖液。
    b. 每孔再加入10微升神經(jīng)氨酸酶。
    c. 每孔再加入0-10微升待篩選的神經(jīng)氨酸酶抑制劑樣品。
    d. 每孔再加入0-10微升Milli-Q水使每孔總體積為90微升。
3. 檢測(參考表1)：
    a. 振動混勻約1分鐘。
    b. 37oC孵育2分鐘使抑制劑和神經(jīng)氨酸酶充分相互作用，標(biāo)準(zhǔn)曲線孔也一起孵育。
    c. 每孔加入10微升神經(jīng)氨酸酶熒光底物。
    d. 再振動混勻約1分鐘。
    e. 37℃孵育30分鐘后進(jìn)行熒光測定。激發(fā)波長為322nm，發(fā)射波長為450nm。
       如果受儀器所限，不能設(shè)置前述波長，激發(fā)波長在310-335nm，發(fā)射波長在430-470nm也有良好的檢
       測效果。不同儀器的熒光檢測靈敏度有所不同，孵育時(shí)間可根據(jù)實(shí)際的熒光讀數(shù)進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。當(dāng)
       熒光讀數(shù)偏低時(shí)，可以延長孵育時(shí)間(例如延長時(shí)間至1、2或4小時(shí))，以提高檢測靈敏度。
       表1.檢測體系的設(shè)置。